世界杯预选赛下注平台(中国)有限公司首页 | 世界杯预选赛下注平台(中国)有限公司 | 部门概况 | 办事指南 | 科研平台 | 科研团队 | 科研成果 | 科技活动 | 管理办法 | 相关下载 | 专题专栏 
站内搜索:
 今天是:

当前位置: 世界杯预选赛下注平台(中国)有限公司>>工作要闻>>正文

 

食品药品制造工程学院韩铭海课题组发表研究论文《一种基于Cre/loxP系统敲除毕赤酵母基因的方法》
2022-04-08 14:05   审核人:   (点击: )

       日前,世界杯预选赛下注平台(中国)有限公司食品药品制造工程学院韩铭海副教授课题组在Journalof Biotechnology上发表了题为《一种基于Cre/loxP系统敲除毕赤酵母基因的方法》(“A modified method of gene disruption inKomagataella phaffiiwith Cre/loxP system”)的研究论文。

毕赤酵母(Komagataella phaffii)是当今商业化生产重组蛋白类产品最常用的宿主之一。这种蛋白表达宿主具有诸多优点:细胞培养密度高、高效而可控的启动子、蛋白翻译后修饰、异源蛋白高效分泌表达、胞外蛋白易于分离和纯化以及公认的安全性等,是当今最受欢迎的蛋白表达平台之一。然而,诸多具有良好商业化应用价值的蛋白仍不能得到高水平的表达,这迫切需要进一步优化改进毕赤酵母蛋白分泌机能。

在2009年,毕赤酵母全基因组测序已完成并公布。在后基因组学研究中,基因操纵是工程改造毕赤酵母最常用的策略,其中基因敲除又是经常使用的技术之一。常规的基因敲除方法需要使用抗生素抗性标记或营养缺陷型标记,而可选择标记是很有限的,这使得删除同一生物体中的多个基因相当困难,阻碍了基础和应用研究的步伐。

而Cre/loxP系统介导的重组提供了筛选标记重复使用的可能性。CRE重组酶催化两个loxP位点之间的重组,不需要任何宿主辅因子或辅助蛋白质。如果位于线性DNA分子上的两个loxP(lox71和lox66)处于同一方向,CRE可以删除它们之间的DNA序列,只留下一个重组的新的loxP(lox72)序列,而新引入的lox72位点是不参与Cre/loxP介导的重组,从而实现永久切除lox71和lox66之间的DNA片段。

在本论文的研究中,课题组设计了一个结构简单的基因敲除盒,它只包含Sh ble基因(ZeocinTM抗性基因)和两侧的loxP位点和同源臂(loxP之间只有大约1400bp),而且通过常用的方法就可以构建这个基因敲除盒,不涉及复杂的操作,比如其他类似文献报道的融合PCR技术。而且在该方法中,可实现lox71-Sh ble-lox66序列的模块化,这为敲除多个基因构建多个基因敲除盒的操作提供了便利。

 

关闭窗口
 
设为首页  |  加入收藏

Copyright@2012-2016 kyc.git All Rights Reserved 版权所有-世界杯预选赛下注平台(中国)有限公司科研处

建议使用1280*800以上分辨率和Internet Explorer 8.0以上版本访问本站